伏马毒素 ELISA 试剂盒 酶联免疫法检测伏马毒素

伏马毒素试剂盒用竞争性酶联免疫法来检测伏马毒素。

应用领域：

谷物 

 检测时间：

20分钟（不包括样品前处理时间）

检测限：0.75ppm

检测范围：0ppm-60ppm

特异性反应

化合物

交叉反应率%

伏马毒素B1

100

伏马毒素B2

124±11

伏马毒素B3

100±10

1.测试原理 测试是通过包被着固相结合的伏马毒素抗体的 塑料微孔板上来执行的。标准品，样品溶液和 酶耦合物都加入到微孔中。第一次培养，游离 的伏马毒素和酶耦合物竞争结合到伏马毒素抗 体上。培养后，任何没有结合物质都将被冲洗 掉。结合在固相上面的酶活性取决于酶底物的 数量。酶就会把无色染料变成蓝色。加入终止 液后，蓝色会变成黄色。然后通过450nm 读数， 颜色的密度和样品中伏马毒素的浓度成反比。

 2.提供的试剂

预混合板：没有包背任何抗体的空白孔，独立可拆分。

COD MF100:96孔（12×8）

微孔板：包被有伏马毒素抗体的微孔板，独立可拆分。

COD MF100:96孔（12×8）

微孔板可独立分拆，这样的话每个微孔可以单独使用。

伏马毒素B1标准液：5瓶1.5ml的伏马毒

素药物标准溶液，浓度分别是0 ppm, 0.75ppm, 4ppm, 20ppm , 60 ppm，白盖塑料 瓶

酶耦合物(enzymeconjugate)：褐色塑料瓶

CODMF100:18ml

10 倍浓缩的冲洗液(washing buffer 10×)： 含50mL 的塑料瓶

发展液(developing solution)：棕色塑料瓶

CODMF100:14ml

终止液(stop solution)：白色盖子玻璃瓶 

CODMF100:8ml

3．实验需要但是没有提供的材料

- 20-200ul，200-1000ul的可变微量取样枪   以及合适的枪头

-50-300ul可调式多道移液枪以及合适的    枪头

-甲醇液

-NaCl（氯化钠）

-  天平，研磨，旋涡

-  蒸馏水或去离子水

- 高速或低速搅拌机或者Shaker（400rpm）

-  离心机

-  磨具

-  纸巾或类似的吸水物

-  450nm 的酶标仪

4．使用者需要注意的警告

-  非诊断试剂

- 有些试剂包含防腐剂，终止液包含硫酸具有腐蚀性。

-  取试剂时要小心，避免接触到皮肤，眼睛和 黏膜。

5．处理和存储说明

-  在2-8℃储存，不能冷冻

- 把未使用的微孔条放回原来有干燥剂的铝薄

袋。

-  不要使用过期产品

-  不要混合不同成分

-  严格按照随试剂所附的说明书操作

6．样品准备

-  仔细混匀样品，细细研碎

-  称样及如何加提取液如下表：

样品

NaCl

提取液

50g

10g

250ml   70%甲醇溶液

5g

1g

25ml   70%甲醇溶液

50g

/

250ml  70%甲醇溶+4%NaCl

5g

/

25ml  70%甲醇溶液+4%NaCl

70%的甲醇溶液+4%NaCl的配制，以100ml溶液为例：称取4克氯化钠加入20ml蒸馏水或者去离子水，再

加70ml 甲醇，最后加去离子水或者蒸馏水定容到100ml。

  -彻底震荡3分钟；

-过滤样品（要用好的滤纸，建议使用 WHATMAN1），取滤液。

-将滤液用蒸馏水用1:20的比例稀释

例如（50ul滤液+950ul蒸馏水）

- 这里建议称取50克样品为好，结果更加准 确；

7．工作溶液的准备

伏马毒素 B1 标准液：即时使用。

酶耦合物：即时使用

冲洗缓冲液：用蒸馏水按 1：10 的倍数 稀释浓缩冲洗液（1+9），注意：当有结晶体存在时，在室温搅拌直至完全溶解。

稀释后的冲洗缓冲液可以在室温下保24小时或者在2-8℃保存2个星期。

发展液：即时使用。(避光保存)

终止液：即时使用。（含2M 的硫酸，小心使用）

8．酶免疫操作过程

8.1样品准备

-  使用前将所有试剂及样品恢复到室     温（2 小时），

-  使用后迅速将所有试剂2-8℃储存

-  不要更改操作流程，尤其是：

-  不要延长或者缩短第一次培养  

时间

- 不要在大于25℃和低于18℃的室温培养试剂板

-  培养时不要摇晃或者振荡试剂 

板

-  使用准确，精确的微量加样枪

-  一旦开始实验，一次性完成操作，不 

要停顿

- ELISA的重现性很大程度上依靠冲洗过程的效率和一致性，所以一直要遵循所描述的操作过程。

-  每次必须使用新的加样头，避免交 

叉污染

- 不要让加样头直接接触微孔板内的液体或者微孔板孔壁

- 避免直接光照到微孔板，建议盖住微孔板，不要用封条

8.2操作步骤

1．预先安排好实验流程，记录好每个标准品，样品的位置，确保必须按照操作进行， 如果条件允许，建议同时做平行实验。把未使用的微孔条放回原来有干燥剂的铝薄袋中，并用夹子夹好。

同时也准备好同样数量无包背抗体的空白预混合孔，建议每次实验不要超过32 个样品包括标准品在内。

2．使用加样枪吸取100ul 的酶偶合物到每个预混合孔。

3．加50ul 的样品和标准品到加好酶偶合物的预混合孔中。

4．使用多道加样枪混合均匀预混合孔中的液体，然后立即取100ul 的液体转移到相对应的包被抗伏马毒素的微孔中。 注意：每一次加样必须使用新的加样头，避免交叉污染。

5．室温（20℃-25℃）下培养 10 分钟

不要在第一个培养时间段延长时间，不要使用自动振荡器

6．冲洗过程

-  倒掉小孔中的液体

- 用装有工作冲洗液的洗瓶冲洗整个小孔，然后倒掉冲洗液

- 在吸水纸上倒扣微孔板并且重重的拍打微孔板，吸去多余的水滴

- 重复刚才的冲洗程序 3次

不能让小孔干掉

7．发展

- 使用多道加样枪吸取100ul 的发展液     到每个小孔，充分地振荡一会儿。

8．在室温（20-25℃）培养10 分钟。

9．使用多道加样枪吸取50ul 的终止液     到每个小孔，并且充分地振荡。

10．酶标仪在450nm 光栅下读数，60分      钟内必须读数。

9．结果计算

计算每个样品和标准品的吸光度值。 计算出样品和标准品的吸光度值除以零浓度标准品吸光度值（B0）的比值，再乘以100 变成百分比。因此最大结合率的吸光度值（B0）的值应该是100%，吸光度比值用百分比表示。

标准品（样品）吸光度值 B

----------------------------------×100=-----(﹪)

零浓度标准品吸光度值 B0

通过 B/B0 的比值可以制定出相应的 曲     线，并且画出标准曲线。

在曲线中添加入每个样品的B/B0 值和相     应的浓度。

通过样品的吸光度比值可以通过曲线计算   出实际的浓度。

10．结果讨论

详细的结果出来以后，必须去检查操作    流程，获得的数据和说明书上提供的来对比，如果数据和说明书上的不符，建议去控制试剂的终了数据，吸光度值波长的记录和操作流程。如果没有操作失误，请联系我们的技术支持。

警告：试剂必须安说明书上的温度保 

存。

11．样品标准曲线