呋喃它酮代谢物ELSIA检测试剂盒说明书

1 原理及用途

呋喃它酮代谢物ELSIA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测蜂蜜、鱼、虾、禽、肝脏等中的呋喃它酮代谢物（AMOZ），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的呋喃它酮代谢物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗呋喃它酮代谢物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含呋喃它酮代谢物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中呋喃它酮代谢物的残留量。

2 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.05ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃，45min～15min。

2.3 检测下限：

组织、肝脏…………………………0.1ppb

蜂蜜、牛奶、肠衣…………………0.1ppb

鱼/虾等水产品组织因有一定干扰，定量下限为0.15ppb

2.4 交叉反应率：

呋喃它酮代谢物…………………100%

呋喃唑酮代谢物…………………<0.1%

呋喃妥因代谢物…………………<0.1%

呋喃西林代谢物…………………<0.1%

2.5 样本回收率：

组织、肝脏…………………………80±25%

蜂蜜、牛奶、肠衣…………………75±15%

3 试剂盒组成

酶标板………………………………………96孔

标准品（绿盖）：各1ml

0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb

高标准品（红盖）：100ppb…………………1ml

酶标记物(红盖)………………………………7ml

抗体工作液(蓝盖)……………………………7ml

衍生化试剂……………………………………10ml

底物液A(白盖)………………………………7ml

底物液B(黑盖)………………………………7ml

终止液(黄盖)…………………………………7ml

20X浓缩洗涤液(透明盖)……………………40 ml

2X复溶液(黄盖)………………………………50 ml

说明书 …………………………………………1份

4 需要的器材和试剂

4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 试剂：乙酸乙酯、正己烷、氢氧化钠、浓HCl、K2HPO4·3H2O、亚硝基铁氰化钾（K2Fe(CN)5(NO)▪2H2O）、ZnSO4·7H2O

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

    实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：0.36M亚硝基铁氰化钾溶液（牛奶、奶粉样本）

11.9g亚硝基铁氰化钾加去离子水至100ml溶解。

配液2：1.04M硫酸锌溶液（牛奶、奶粉样本）

    29.8g硫酸锌加去离子水至100ml溶解。

配液3：0.1M  K2HPO4 溶液

    称11.4g K2HPO4▪3H2O加去离子水溶解定溶至500ml。

配液4：1M  HCL

    8.6mL浓HCL加去离子水定容至100mL。

配液5：1M  NaOH溶液

    称取4g NaOH，加去离子水定容至100ml。

配液6：复溶液

    2×复溶液在使用前请按1:1稀释。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 牛奶样本处理方法

1）取5ml样本于离心管中，加250ul 亚硝基铁氰化钾溶液（配液1）振荡混合30秒，加250ul 硫酸锌溶液（配液2）振荡混合30秒，15℃4000转/分离心10分钟；

2）取上清1.1ml，加4ml去离子水、0.5 ml 1M 盐酸溶液和100μl衍生化试剂，振荡5分钟；</